k5裂解酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质分析

k5多糖裂解酶(elma)能够裂解半合成肝素的底物-k5多糖，裂解产物是半合成法生产低分子量肝素的底物。利用pcr方法扩增elma，构建表达载体pet-28a-elma，将构建好的质粒转化至大肠杆菌bl21中，以0.2mmol/l的iptg在16℃诱导5h实现了高效表达，sds-page分析表明elma表达量可达菌体总蛋白的30％以上。采用ni2+-nta亲和层析法和g-75分子筛层析纯化目的蛋白，其纯度大于95％。通过page多糖电泳发现裂解前后的k5多糖分子量有明显的减小。根据elma裂解产物产生双键从而在232nm处有吸光度的变化来测elma的酶活。其最适反应温度为37℃，反应的最适ph值为7.0。底物特异性分析发现elma除k5多糖外对肝素和透明质酸也有降解作用。