利用定点突变法研究精氨酸脱亚胺酶活性的影响机制

精氨酸脱亚胺酶(adi)是一种针对精氨酸缺陷型癌症(如：肝癌、黑素瘤)的新药，目前处于临床三期试验。文中通过定点突变技术分析了精氨酸脱亚胺酶的特定氨基酸位点对酶活力的影响机制。针对已报道的关键氨基酸残基a128、h404、i410，采用quikchange法进行定点突变，获得adi突变株m1(a128t)、m2(h404r)、m3(i410l)和m4(a128t/h404r)。将突变株在大肠杆菌bl21(de3)中进行重组表达，并对纯化获得的突变蛋白进行酶学性质研究。结果表明，突变位点a128t和h404r对adi最适ph的提高，生理中性(ph7.4)条件下的酶活力和稳定性的提高，以及km值的降低均具有显著的作用。研究结果为阐明adi的酶活力影响机制和蛋白质的理性改造提供了一定的依据。