蜡样芽胞杆菌gxbc-3三个普鲁兰酶基因的表达及其酶学特性

探索获得优良的新型普鲁兰酶基因，丰富普鲁兰酶理论，对实现普鲁兰酶国产化具有重要意义。分析genbank数据库中蜡样芽胞杆菌假定ⅰ型、ⅱ型普鲁兰酶基因序列，从实验室保藏的蜡样芽胞杆菌bacilluscereusgxbc-3中克隆得到3个普鲁兰酶基因pula、pulb、pulc，并分别导入大肠杆菌进行胞内诱导表达。纯化重组酶酶学性质研究表明重组酶pula能水解α-l,6-和α-l,4-糖苷键，为ⅱ型普鲁兰酶，以普鲁兰糖为底物时，最适反应温度及ph分别为40℃和6.5，比活力为32.89u/mg；以可溶性淀粉为底物时，最适反应温度及ph分别为50℃和7.0，比活力为25.71u/mg。重组酶pulb和pulc二者均只能水解α-l,6-糖苷键，为i型普鲁兰酶，以普鲁兰糖为底物时，其最适反应温度及ph分别为45℃、7.0和45℃、6.5，比活力分别为228.54u/mg和229.65u/mg。