预防幼畜腹泻双价工程菌苗株的构建及表达

bamhi部分酶切表达k99抗原的重组质粒pmgk99，将其与相同酶切的含有f41菌毛基因的片段相连接，构建了载有两种抗原基因的质粒pmg611。通过转化大肠杆菌k12hb101、rri和c600，得到hblol(pmg611)、rrl(pmg611)和c600(pmg611)菌株。经甘露糖抗性血凝试验、玻片凝集试验和westernblot分析证明k99和f4l两种菌毛抗原在每株菌中均获表达。sds—page结果表明所表达k99和f4l菌毛亚单位的分子量与其各自野生株所产生的相同，分别是17200和29800da，elisa测定hb101(pmg611)菌株表达k99和k41菌毛抗原的水平与相应出发菌株相同，而高于其野生株。本实验对质粒pmg611表达k99和f41菌毛抗原的影响因素也进行了研究。