人细小病毒b19病毒样颗粒的制备

采用昆虫杆状病毒表达系统,制备人细小病毒b19病毒样颗粒(vlps)。先通过pcr方法合成细小病毒b19衣壳蛋白基因vp2,将其克隆到pfastbac1质粒,然后转化含杆状病毒穿梭载体bacmid的e.colidh10bac感受态细胞,获得重组杆状病毒表达质粒bacmid-vp2。在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,包装重组杆状病毒rbac-vp2。利用rbac-vp2感染sf9细胞表达b19vp2蛋白,通过间接免疫荧光、westernblotting等方法鉴定目的蛋白表达。采用两次超速离心的方法对表达产物进行纯化,纯化产物在透射电镜下可见直径约22nm的vlps。本研究成功制备了人细小病毒b19的vlps,为b19感染血清学检测方法的建立提供了参考。