表达食血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂的毕赤酵母菌株的构建

食血蝙蝠(desmodusrotundus)在吸食大型动物血液时能保持创口处血流的畅通。本研究根据食血蝙蝠唾液中发现的纤溶酶原激活剂(bat-pa,另称dspaa1)的全长基因序列(genbankaccessionno.j05082),首次在体外人工合成bat-pa全长基因并亚克隆到巴斯德毕赤酵母(pichiapastoris)表达载体ppic9k上;转化毕赤酵母菌株gs115后,经甲醇诱导获得dspaa1的分泌型表达,表达条带为47kd;通过抗g418浓度梯度筛选、毕赤酵母中小量表达后sds-page电泳检测以及纤维平板法测活,筛选出高表达的dspaa1稳定菌株,对电泳中的目的蛋白条带进行密度扫描测定,产量达到约30mg/l。目前,dspaa1主要来自哺乳动物细胞,如中国仓鼠卵巢细胞(cho)、胚胎卵巢肾细胞(bhk)、非洲绿猴肾细胞(cos),代价高昂。在毕赤酵母中生产dspaa1可以降低成本,增加产率,为探索bat-pa作为新一代溶栓剂奠定基础。