淀粉液化芽孢杆菌b-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的克隆及表达的优化

为了比较不同的表达系统对b-1,3-1,4-葡聚糖酶基因(bgl)的效果,本研究将高产b-1,3-1,4-葡聚糖酶的淀粉液化芽孢杆菌bacillusamyloliquefaciensbs5582的bgl基因(genbankaccessionno.eu623974)克隆到3种不同的质粒载体中,即构建pegx-4t-1-bgl、pet20b(+)-bgl和pet28a(+)-bgl重组质粒。比较了pegx-4t-1-bgl在不同escherichiacoli宿主中表达效果,以及pet20b(+)-bgl和pet28a(+)-bgl在e.colibl21(de3)中的表达效果。结果表明,e.colibl21(de3)-pet28a(+)-bgl能够表达最高的重组b-1,3-1,4-葡聚糖酶酶活,其总酶活可达(322.0±8.8)u/ml,是出发菌在最适摇瓶发酵条件下产酶活的40.1%。对该重组菌的产酶条件进行了分析,结合iptg和乳糖协同的诱导作用,在基础产酶培养基中产最高总酶活为(1883.3±45.8)u/ml,表明其具有良好的工业应用价值。