口蹄疫病毒三价复合多表位佐剂dna疫苗构建及其免疫原性

以o型、a型口蹄疫病毒(fmdv)结构蛋白vp1全基因和asiai型fmdv两个基因拓扑型的结构蛋白vp1基因上的5个抗原表位基因作为主要免疫原基因,以来源于非结构蛋白3abc和结构蛋白vp4上的3个th2细胞表位基因作为辅助基因,构建了o型、a型和asia1型fmdv复合多表位基因工程疫苗表达盒oaat,在此基础上,以金黄色葡萄球菌肠毒素a(sea)为基因佐剂,通过分子设计构建了sea与oaat融合表达基因。将构建好的表达盒oaat与sea融合表达基因克隆至真核表达载体pvax1pcmv启动子下游,构建了口蹄疫三价基因佐剂dna疫苗pea。经westernblotting和ifa检测,目的蛋白在hela细胞中获得正确表达。小鼠免疫实验表明,pa和pea免疫组的血清抗体均能分别与o型、a型和asiai抗原反应,与对照组相比差异较显著,且pea免疫组和灭活疫苗免疫组抗体水平均显著高于pa免疫组;同时pa和pea免疫小鼠细胞因子il-2、ifn-g、il-4和il-10较对照组显著提高,且pea免疫组的il-2、ifn-g和il-4水平明显高于pa免疫组。用o/ny00和asia1/ynbs/58株fmdv进行豚鼠攻毒免疫保护试验,结果表明o型和asia1型fmdv二联灭活疫苗免疫组均获得完全保护,pa免疫组均获得2/4保护,pea免疫组均获得3/4保护,而pvax1和pbs免疫组完全没有保护。实验结果表明,sea与oaat融合表达蛋白具有较好免疫原性,且sea可以作为dna疫苗的有效基因佐剂。