表达小反刍兽疫h蛋白的重组山羊痘病毒疫苗

本研究旨在构建表达小反刍兽疫h蛋白的重组山羊痘病毒,并评价其免疫效力。利用筛选基因gpt和egfp并结合空斑技术,纯化筛选了重组小反刍兽疫h基因的重组山羊痘病毒(rgpv-pprv-h),经过pcr鉴定重组病毒已纯化。免疫荧光和蛋白印迹都表明重组病毒能够感染绵羊羔羊睾丸细胞表达小反刍兽疫h蛋白。以2×106pfu的rgpv-pprv-h皮内注射免疫山羊6只,并于首次免疫后28d以相同剂量进行二次免疫。免疫后采血分离血清进行病毒中和试验,结果表明,一次免疫后21d,山羊痘病毒中和抗体效价依次为40、80、≥80、≥80、40、≥80,和小反刍兽疫病毒中和抗体效价全部转阳依次为80、80、80、80、40、40、10;二次免疫后14d,山羊痘病毒中和抗体效价抗体全部大于或等于80,小反刍兽疫病毒中和抗体效价依次为≥80、80、≥80、80、80、40,应该具有对山羊痘病毒和小反刍兽疫病毒强毒攻击的完全免疫保护作用。本研究为小反刍兽疫重组山羊痘疫苗的产业化提供了参考。