表达猪繁殖与呼吸综合征病毒gp5和m融合蛋白的重组腺病毒的构建及其对小鼠的免疫原性

利用口蹄疫病毒(fmdv)2a蛋白具有自我裂解的功能,将其作为连接肽将猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv)的gp5和m蛋白编码基因串联,置于复制缺陷型腺病毒载体的表达盒中,通过一次转录和翻译,可以同时实现2个蛋白的表达,以发挥gp5蛋白的病毒中和优势和m蛋白的细胞免疫优势作用。分别利用rt-pcr、间接免疫荧光和westernblotting等方法,对获得的重组腺病毒(rad-gp5-2a-m)进行检测,结果均证明gp5-2a-m蛋白不仅获得了正确表达,而且能自我裂解为gp5和m蛋白。以单独表达gp5(rad-gp5)、m(rad-m)和融合表达gp5-m(rad-gp5-m)的重组腺病毒为对照,研究该重组腺病毒在小鼠体内诱导免疫应答情况,结果表明,虽然4种重组腺病毒均能诱导小鼠产生特异性抗体和细胞免疫反应,但重组腺病毒rad-gp5-2a-m所诱导产生的体液免疫和细胞免疫应答水平最高。本研究结果提示,利用fmdv2a蛋白酶的自动裂解功能构建prrsv复合基因工程疫苗是一种切实可行的新策略,也为构建其他动物病毒病的基因工程疫苗提供了新思路。