cck39/ureb双基因融合表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

本研究报道了猪源性胆囊收缩素39肽(cholecystokinin39,cck39)和猪肠道大肠菌群脲酶b亚基(ureaseb,ureb)融合的原核表达载体的构建,以及兼有cck39和ureb功能活性域的融合蛋白的表达。利用rt-pcr从猪十二指肠总rna中克隆cck39,再通过pcr从猪肠道产脲酶大肠菌群质粒中克隆ureb,之后将扩增所得的两基因先后定向插入原核表达载体pet43a(+)中,构建双基因融合表达载体pet43a(+)/cck39/ureb,并转化至大肠杆菌(escherichiacoli)bl-21(de3)中。重组质粒pet43a(+)/cck39/ureb经pcr、双酶切鉴定和序列分析,证实已成功构建双基因融合表达载体。重组表达菌经isopropylthio-b-d-galactoside(iptg)诱导表达了分子量约为80kd的融合蛋白,与预期分子量相同,主要以可溶蛋白的形式存在于细胞质中;用ni2+-nta对可溶蛋白进行亲和纯化,纯度大于95%;westernblotting分析结果显示重组融合蛋白可分别为cck8和ureb抗血清识别,具有良好的反应原性。本研究所表达的融合蛋白为研制抗cck/urease双效疫苗奠定了基础。