|
生物工程学报 2010
人工诱骗子的入核分布对核因子-κb活性的调控作用, PP. 1683-1689 Keywords: 核因子-κb,寡核苷酸诱骗子,sulfo-smcc交联试剂,核定位信号多肽 Abstract: 探讨了由核定位信号(nls)多肽介导的核因子-κb(nf-κb)寡核苷酸诱骗子(odnsdecoy)进入hela细胞核的效率,以及对细胞核内nf-κb活性的调控作用。利用双功能交联剂(sulfo-smcc)共价交联末端氨基修饰的odnsdecoy和末端巯基修饰的nls多肽,形成nls多肽共价连接的odnsdecoy。依靠transme转染试剂的辅助转染nls-odnsdecoy进入hela细胞,用荧光显微镜观察荧光标记的nls-odns在细胞内的分布。用mtt法检测hela细胞的活力,以凝胶迁移实验(emsa)检测tnf-α诱导的hela细胞核抽提物中nf-κb的活性。结果表明,nls多肽成功地连接到odnsdecoy上,nls-odns可高效入核,入核率达到17.9%。转染nls-odns进入hela细胞,对细胞活力无明显影响,而显著抑制核内nf-κb的活性。结果表明nls多肽可提高odnsdecoy的入核效率,显著增强诱骗子对nf-κb活性的抑制效果。
|