克隆毒素源性大肠杆菌k88ac抗原基因

e.coli79-l454(08：k88ack31：h-)是北京生物制品检定所从上海郊区腹泻的仔猪分离到的野生型毒素源性大肠杆菌，该菌产生k88ac抗原，产生热敏感毒素(lt)和热稳定毒素(st)。发酵棉子糖，抗四环素，含有50md的大质粒。用碱变性法提取，以线性cscl-eb密度梯度离心法纯化大质粒，用hindⅲ酶消化，回收6.5md的片段，与载体pbr322连接，转化到e.colirrl，选出ap1tc2的转化子，用玻片凝集，琼艚扩散。k88ac抗血清致敏的绵羊红细胞反向间接血凝，被动溶血，elisa等方法检测k88ac抗原均为阳性的重组体，其中一株命名为e.colirr1(pmm031)，酶切图谱表明除含pbr322dna的片段外，还台有约为6．5md的片段，此片段是hindⅲ酶消化大质粒dna产生的第二条片段，含有为k88ac抗原基因编码的遗传决定子。用lt基因探针菌落原位杂交，y—l肾细胞试验等方法检测结果表明重组体不产生lt;用乳鼠试验及stb基因探针杂交均是阴性，说明重组体不产生st。由此可见重组体产生k88ac抗原，但无毒性，有可能用作疫苗栋，也可以与其他因子配伍构建成更好的活疫苗株。