少根根霉δ6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中的表达

δ6-脂肪酸脱氢酶是一种膜整合蛋白，也是多不饱和脂肪酸合成途径中的限速酶。在前期工作中，通过rt-pcr和race技术，从少根根霉nk300037中克隆到一个潜在编码δ6-脂肪酸脱氢酶的序列，序列和功能分析结果表明该序列具有一个长度为1377bp、编码由458个氨基酸组成、大小为52kd的新的δ6-脂肪酸脱氢酶基因。把少根根霉δ6-脂肪酸脱氢酶基因(rad6)亚克隆到表达载体ppic3.5k，构建重组表达载体ppicrad6，并转化到毕赤酵母菌株gs115进行表达。提取酵母细胞总脂肪酸和进行甲酯化，经气相色谱和气相色谱质谱连用分析表明，目的基因的编码产物能将c16∶1、c17∶1、c18∶1、亚油酸和α-亚麻酸在δ6和7位间特异性脱氢而引入一个新的双键，生成更高不饱和的脂肪酸，该催化反应没有链长特异性，只有键位特异性。此外，按kozak序列特点，改变目的基因转译起始密码子周边序列结构，并把改变后序列导入毕赤酵母gs115中进行功能表达分析，结果表明在毕赤酵母中这种改变同样能提高目的基因的表达水平。综合所有分析结果表明，巴斯德毕赤酵母更适合用来综合分析δ6-脂肪酸脱氢酶基因的功能。