甲基对硫磷水解酶参与催化相关结构的研究

甲基对硫磷水解酶（mph）是一种新的有机磷水解酶。将完整的甲基对硫磷水解酶基因（mpd）构建入puc19载体，使得mpd基因以自身的启动子在escherichiacolidh5α中表达并得到了纯化。金属螯合实验发现mph的活性不受金属螯合剂1,10菲nfda1啉的影响；但用电感耦合等离子发射光谱测定其金属含量显示mph是金属酶，1mol酶中结合了2mol的zn2+。为确定参与mph催化活性的必需氨基酸，用化学修饰剂碳化二亚胺、二乙基焦磷酸酯、磷酸吡哆醛和丁二酮处理mph，然后检测其残余酶活力，结果表明天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸和精氨酸残基与酶的催化活性无关；而二乙基焦磷酸酯对组氨酸侧链的化学修饰引起酶活性的大幅度的下降，其对酶活性的抑制率达到9.6h-1，说明组氨酸是酶活力所必需的基团。这些结果为进一步研究酶的结构及对酶进行分子改造提供了必要的基础数据。