产1,3-丙二醇新型重组大肠杆菌的构建

利用pcr技术从大肠杆菌(escherichiacoli)中扩增出1.16kb的编码1,3-丙二醇氧化还原酶同工酶的基因yqhd，将其连接到表达载体petac，得到重组载体petac-yqhd，重组载体在大肠杆菌jm109中得到高效表达。sds_page分析显示融合表达产物的分子量均为43kd，同核酸序列测定所推导的值相符。对含有yqh-d的基因工程菌进行表达研究表明：37℃，以1.0mmol/liptg诱导4h，1,3-丙二醇氧化还原酶同工酶的酶活力达到120u/mg蛋白，而对照菌株的酶活力为0.5u/mg蛋白。再将含甘油脱水酶基因dhab和含1,3-丙二醇氧化还原酶同工酶基因yqhd的重组质粒共转化大肠杆菌jm109得到重组大肠杆菌jm109（puctac-dhab,petac-yqhd），该菌株在好氧条件下，以1.0mmol/liptg诱导可将50g/l甘油转化为38.0g/l1,3-丙二醇。首次发现1,3-丙二醇氧化还原酶同工酶在好氧条件下表现出较高的活性。