vpac2在cho细胞的表达及鉴定

pac2是垂体腺苷酸环化酶激活多肽（pituitaryadenylatecyclaseactivatingpolypeptide，pacap)和血管活性肠肽（vasoactiveintestinalpeptide，vip)的共同受体，介导多种重要生物学功能。为获得稳定特异表达vpac2的中国仓鼠卵巢（chinesehamsterovary,cho）细胞，将pcdnavpac2表达载体转染cho细胞，g418筛选转染阳性克隆，pacap38标准品诱导阳性克隆细胞的胞内camp生成，筛选出对pacap38最为敏感的阳性单克隆细胞株（vpac2-cho），运用rt-pcr、westernblot和免疫荧光法检测vpac2受体表达情况，利用vpac2受体特异激动剂通过竞争性结合试验和促进胞内第二信使camp生成的活性检测实验证实，vpac2-cho特异表达有功能的vpac2。scatchard作图分析显示vpac2-cho的vpac2受体密度为(1.1±0.2)pmol/mg膜蛋白，pacap38与vpac2的解离常数kd值为(0.55±0.10)nmol/l。特异表达vpac2受体细胞系的构建为深入研究该受体理化性质、生物学功能以及筛选、开发vpac2受体新型特异激动剂和拮抗剂等研究奠定了基础。