抗对虾白斑综合症病毒单链抗体p1d3基因在毕赤酵母中的分泌表达

为了将可中和对虾白斑综合症病毒（wssv）的单链抗体p1d3在酵母中实现表达，以原核表达载体m13噬菌粒为模板，设计带有snabⅰ和ecorⅰ酶切位点的特异性引物，通过pcr方法扩增p1d3基因。经过酶切、连接反应将该基因连入大肠杆菌酵母穿梭质粒ppic9k上。重组质粒ppic9k-scfvp1d3经bglⅱ线性化后，用电转化的方法转入毕赤酵母（pichiapastoris）gs115中。通过pcr和dna测序，挑选和鉴定阳性克隆。经甲醇诱导，p1d3在酵母中获得分泌表达。elisa实验结果表明，酵母表达上清液中的单链抗体具有较高的wssv结合活性，而且其活性要高于大肠杆菌所表达抗体的活性。表达条件优化后，单链抗体在酵母中最高表达量可达302mg/l，为开展对虾被动免疫研究提供了新的抗体来源。