重组人il-4大肠杆菌表达与纯化

根据大肠杆菌密码子偏爱性优化并合成人白细胞介素4基因，以pet30a(+)为载体构建了重组表达质粒pet30a(+)/rhil-4，将重组质粒转化大肠杆菌bl21(de3)感受态细胞，诱导表达并超声破菌检测重组蛋白的表达形式。采用5l发酵罐培养工程菌，发酵液od600为0.6时诱导3.5h收集菌体，检测目的蛋白的表达量。收集的菌体经压榨破菌获得包涵体，通过包涵体变性、层析、透析复性等方法对rhil-4进行纯化。采用人红细胞白血病细胞（tf-1）测定纯化的rhil-4的生物活性。测序表明目的基因已插入载体pet30a(+)中，重组蛋白以包涵体形式表达，单位体积重组蛋白的表达量达200mg/l发酵液，建立了对包涵体形式表达的rhil-4纯化方法，最终得率为40mg/l发酵液，纯度大于98％，回收率为20％以上。免疫印迹法检测诱导表达的重组蛋白和纯化的蛋白为il-4，n端氨基酸序列测定结果与理论相符，生物活性检测纯化的蛋白比活性达2.5×106au/mg。这为rhil-4进一步产业化研究建立了基础。