表达鸡新城疫病毒f、hn基因和传染性喉气管炎病毒gb基因的重组鸡痘病毒的构建及其特性研究

利用同源重组将新城疫病毒（ndv）的f和hn基因、传染性喉气管炎病毒（iltv）的gb基因以及报告基因lacz插入鸡痘病毒（fpv）的017株的复制非必需区，其中ndv的f、hn基因、iltv的gb基因以及报告基因lacz是在早晚期启动子lp2ep2的控制下，大肠杆菌报告基因lacz在晚期启动子p11的控制下。经过10轮蓝斑纯化获得了包含了ndv的f和hn基因、iltv的gb基因以及报告基因lacz的重组鸡痘病毒，称为rfpv-f/hn/gb/lacz。经pcr方法证明rfpv-f/hn/gb/lacz基因组中含有ndv的f基因、hn基因和iltvgb基因；间接免疫荧光试验和western-blot试验表明ndv的f、hn蛋白和iltvgb蛋白在rfpv-f/hn/gb/lacz感染的cef细胞中获得表达。与亲本毒相比，重组病毒在病毒的复制和致鸡胚成纤维细胞的病变方面无显著不同。这证明了在鸡痘病毒载体的一个复制非必需区可以同时插入多个禽类病原的多个外源基因，为制备多价基因工程疫苗奠定了基础。