腺病毒介导hil-24抑制裸鼠肝癌荷瘤生长及其机制研究

为了研究腺病毒hil-24抑制smmc-7721肝癌细胞裸鼠荷瘤的生长抑制及其作用机制，构建了重组腺病毒载体padeasy-1-ptrack-cmv-hil-24(ad-hil-24)，经paci线性化后转染qbi-293a细胞，多轮感染后收获高效价腺病毒重组病毒子。用smmc-7721肝癌细胞使16只裸鼠致瘤，然后随机ns分成干预组、5-fu组、ad组和ad-hil-24组，进行抗肿瘤试验。四组均使用瘤体内注射干预用药，100μl/只：ns组、ad组(107pfu)和ad-hil-24组(10-7pfu)隔日一次，共注射5次；5-fu组20μg/kg，连续注射5d。用药前、用药后1周和2周分别测皮下瘤体的长径(l)、短径(w)，计算出瘤体体积，治疗开始后第15天，将裸鼠脱颈处死，摘取瘤体称重，计算出抑瘤率。显微镜观察细胞生长形态、免疫组化法测caspase3蛋白表达、p53及p27核内抑癌基因表达、cd34染色标记测定的mvd及vegf蛋白表达。与ns组比较，ad-hil-24组与5_fu组的抑瘤率分别为68.52%(p<0.01)和65.64%(p<0.01)；镜下：ad-hil-24组肿瘤组织的caspase3蛋白表达细胞数较其它3组呈显著性升高(p<0.01)，p27核内抑癌基因表达细胞数也较ns组明显增高(p<0.01)，cd34染色标记测定的cd34及vegf较ns组和ad组明显减少(p<0.001)，p53未见明显变化。结论ad-hil-24可以显著抑制裸鼠smmc-7721荷瘤的生长，其机制可能通过激活caspase途径、上调p27抑癌基因表达、抑制血管形成等多途径发挥抑瘤作用。