人骨形态发生蛋白7（hbmp7）在毕赤酵母中的分泌表达

依据酵母密码子使用偏好性，利用重叠延伸pcr（oe-pcr）介导的定点突变方法，对人骨形态发生蛋白-7(humanbonemorphogeneticprotein-7,hbmp7)成熟肽编码序列进行改造，将毕赤酵母低频使用的精氨酸密码子cgg或cga突变为高频使用的同义密码子aga，明显提高了hbmp7成熟肽在毕赤酵母中的表达量：摇瓶培养表达量为25.45mg/l，是改造前序列的4.6倍；tricinesds-page及western-blotting结果表明，rhbmp7成熟肽分子量为18kd，以单体形式存在，具有良好的免疫原性；利用梯度浓度g418筛选到一株高拷贝整合的转化子，该转化子摇瓶表达量为45.45mg/l，约为单拷贝转化子的2倍。表达上清经阳离子交换介质spsepharose○rfastflow纯化后，目的蛋白纯度达到90％。纯化后的样品与i型胶原混合冻干后埋植于小鼠股部肌袋内，能异位诱导间充质细胞分化形成软骨细胞。