诺卡氏菌酰胺酶基因的分子克隆及在大肠杆菌中表达的初步研究

酰胺酶是一种重要的工业酶。利用生物信息学手段，在和已知酰胺酶基因序列分析比对的基础上，首次从ncordiasp.ys-2002中成功地克隆得到酰胺酶基因ami，并对其基因序列及氨基酸序列的性质进行了分析。结果表明，所得酰胺酶基因ami片段大小共为1446bp，由启动子区、阅读框和回文结构终止区三部分构成。序列分析和进化树分析表明，ncordiasp.ys-2002酰胺酶是一种比较特殊的酰胺酶，不含大多数酰胺酶共同具有的保守区序列。进一步将酰胺酶基因连接到pet28a（+）上，转入大肠杆菌bl21(de3)中筛选获得重组菌株peab。酶活测定结果表明：重组菌具有酰胺酶酶活，但较低，其原因可能是因为大量表达的产物主要以包涵体的形式存在。