利用长引物嵌套式反向pcr方法克隆雅致枝霉δ6-脂肪酸脱氢酶基因上游序列

用限制酶ecorⅰ、kpnⅰ分别对雅致枝霉as32806基因组dna进行消化，而后在低浓度条件下利用t4dna连接酶使dna自身环化。根据已知基因序列，设计一对长度为35nt的长反向引物和两对较短的引物，以基因组连接产物为模板，通过三轮嵌套式pcr反应，获得一长度约为4kb的扩增片段。经序列测定表明得到了δ6-脂肪酸脱氢酶基因上游序列约为1.3kb，初步序列分析显示该序列为一潜在的启动子序列。