修饰的含前s1、前s2免疫决定簇乙肝表面抗原融合多肽在毕赤酵母中的共表达

用bamhⅰ和bglⅱ双酶切含ss2嵌合基因片段的重组质粒pao815-ss2，分离含aox1启动子区、ss2嵌合基因和aox1转录终止序列的表达盒。将分离的bamhⅰ-bglⅱ表达盒与经bamhⅰ线性化的pao815-ss1质粒连接，转化大肠杆菌top10f′，提取质粒，用bamhⅰ和bglⅱ双酶切分析重组质粒并筛选正向插入ss2表达盒的重组子。将该重组质粒用电转化法导入pichiapastorisgs115细胞，经表型筛选、小试表达和产物鉴定，构建了重组表达菌株gs115-ss1s2。重组菌株经甲醇诱导后制备抗原粗提液，进一步进行elisa和westernblot鉴定。elisa结果显示，产物同时具有s、前s1和前s2抗原性。westernblot分析进一步表明，表达产物既能与s抗体结合，也能与前s1和前s2抗体结合。工程菌经高密度发酵，表达量达到300～600mg/l。抗原经纯化后进行电镜观察，形成直径20～35nm的球形颗粒。纯化抗原经sds-page分析，ss1和ss2多肽仍然保持完整，基本无降解。