人白细胞介素-3基因在酿酒酵母中的分泌表达

利用pcr突变方法,改造了人白细胞介素-3(hil-3)cdna,在成熟蛋白编码顺序5＇端前突变入了xbaⅰ酶切位点和酵母类胰蛋白酶加工位点lys-arg的密码子。改造后的hil-3cdna插入大肠杆菌-酵母穿梭质粒pvt102u/α,使其准确融合于α-交配因子前导序列之后,并置于启动子adh1调控之下。转化入酿酒酵母宿主菌s-78筛选后,30℃培养48h,上清能明显促进hil-3依赖细胞tf-1生长。上清中分泌表达的hil-3经elisa鉴定并定量,其表达量大于1.0mg/l。3h-tdr掺入法测定上清中hil-3活性为1.8×103u/ml。