嗜热脂肪芽孢杆菌hy-69耐热金属蛋白酶基因表达产物的纯化及性质研究

利用cm纤维素离子交换层析法，从宿主细胞枯草芽孢杆菌mi113中纯化了嗜热脂肪芽孢杆菌hy69的耐热金属蛋白酶基因的表达产物，达电泳纯。该酶的最适反应温度为70℃，有着较好的热稳定性和极高的盐酸胍抗性。70℃的半寿期为45min。在3mol/l的盐酸胍中变性20min，仍残余近40%的酶活。利用凝胶过滤和sdspage，测定其分子量均为27000±1000。通过cd光谱得知，该酶含有66%的α-螺旋，28%的β-转角，6%的无规则卷曲，无β-折叠。利用cd光谱和荧光光谱研究了该酶在盐酸胍变性过程中的构象变化，推测其主要是通过增加包装效率，减少无规则卷曲来提高酶的稳定性。