人促红细胞生成素基因在家蚕体中的高效表达

人促红细胞生成素(epo)是一种调控红系干细胞增殖、分化和成熟的糖蛋白激素。将合成的epocdna插入杆状病毒转移载体pbluebacⅲ，使其置于ph基因强启动子控制之下，获得了转移载体pbluebacepo。将pbluebacepodna与野生型bmnpvdna共转染bmn细胞，经空斑纯化，获插入epocdna的重组病毒rbmnpvepo。经sonthern杂交和pcr扩增鉴定证明人epo基因已正确组建于bmnpv的预定位置。将重组病毒rbmnpvepo穿刺接种5龄幼虫和蛹，收集感染第3～5d的幼虫血淋巴和3～6.5d蛹血淋巴。用elisa检测幼虫血淋巴中epo表达量高达62800u/ml，蛹血淋巴中表达量达74000u/ml。westernblot结果显示幼虫血淋巴和蛹血淋巴均有一条明显的免疫杂交带，分子量均约为26kd。用tf1细胞对幼虫表达产物进行了生物活性测定，每毫升血淋巴中epo活性约为63000u。