柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cdna文库的构建

用建立表达性文库的方法,构建了eimeriatenella孢子化卵囊噬菌体zap表达性cdna文库。首先用trizol试剂盒从e.tenella孢子化卵囊中提取总rna,再用oligo(dt)12纤维素柱从总rna中分离mrna,以mrna为模板,oligo(dt)18linkerprimer为引物,反转录合成cdna第一链,再在dna聚合酶ⅰ作用下置换合成第二链cdna。cdna第二链合成后用pfudna聚合酶补平xhoⅰ位点,再与ecorⅰadapters连接,经xhoⅰ酶切后,凝胶电泳回收500bp～4.0kp之间的cdna片段,纯化后的双链cdna与载体zapexpressvector连接。体外包装后得到e.tenella孢子化卵囊的cdna表达性文库,经测定该文库的容量为6×106,扩增后文库的滴度为1×1011pfuml,经pcr测定,该文库的重组率为96%。