人leptin基因在大肠杆菌中的高效表达、纯化及其生物学活性研究

将人leptin表达质粒pbv220-ob转化e.colijm109，经热诱导获得了目的蛋白的表达。经sds-page鉴定分析，表达产物以包涵体形式存在，目的蛋白表达量占菌体总蛋白的40%以上。通过包涵体分离，sephacryls200hr凝胶和deae52离子交换层析及hypersilc18柱反相色谱纯化，获得纯度在95%以上，内毒素含量小于10eu/mg的高纯度的重组人leptin。western-blot鉴定表明，纯化表达产物能和抗leptin抗体特异性结合；蛋白质n端15个氨基酸序列分析结果和预期的序列一致。纯化产物经复性处理，其分子中cys96和cys146形成二硫键。体内活性检测显示，纯化和复性的rh-leptin明显抑制balb/c小鼠的进食和体重增长，提示其具有明显的生物学活性。