血管生成抑制因子k4k5cdna基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

应用pcr方法，扩增人纤溶酶原cdna基因中k4k5cdna片段，与酵母表达载体ppic9k重组，获得表达质粒p9kkk18。该质粒转化毕赤酵母菌gs115，用g418ypd筛选高拷贝表型，pcr筛选k4k5cdna与酵母染色体整合形成的阳性克隆，阳性克隆用甲醇诱导表达。表达产物rk4k5分子量约215kd，占分泌总蛋白80%以上，产物浓度为150～250mg/l。初步纯化产物抑制牛毛细血管内皮(bce)细胞增殖与鸡胚绒毛尿囊膜(cam)新生血管生成。