hcv特异性反义rna表达载体的构建及活性评价

反义rna是反义技术的一个重要领域，为探索丙型肝炎病毒治疗新途径及验证转基因细胞模型hepg2.9706的有效性，设计了一条互补于hcv5′ncr及翻译起始区(39713核苷酸)的反义rna序列，将其插入pgl3载体sv40启动子下游，构建了hcv特异性的反义rna真核表达载体(phcv-asr)。通过pcr扩增、酶切反应及序列分析进行了初步鉴定，并将其转染hepg2细胞，通过rtpcr方法检测其在细胞中的表达并将phcv-asr转染转基因细胞模型hepg2.9706，评价其对hcv5′ncr的抑制活性。结果表明，构建的反义rna表达载体插入序列正确，并能在hepg2细胞中表达；phcv-asr在hepg2.9706中对hcv5′ncr调控荧光素酶基因表达具有特异性的剂量依赖性抑制活性，最高抑制率可达57%。