提高三角酵母细胞dao表观活力的透性化研究

三角酵母(trigonopsisvariabilis)的d-氨基酸氧化酶(d-aminoacidoxidase,dao,ec1.4.3.3)是一种胞内酶，完整细胞并不呈现酶促活性。为了获得三角酵母细胞的较高表观活力，需对细胞进行处理以改变壁和膜对反应底物和产物的通透性。研究中比较了冻融、丙酮、丁醇和十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammoniumbromide,ctab)等理化因子的透性化效率，并对丙酮的透性化条件进行了优化。证明丙酮的透性化作用与溶剂浓度、保温时间和温度有关。30%～35%丙酮浓度，4～28℃保温，可得到最大酶活力。透性化所需时间极短，在5min内即可完成。同时，透性化细胞中的dao比无细胞抽提液中的酶对热更为稳定。用丙酮透性化细胞作为生物催化剂可有效地转化头孢菌素c(cephalosporinc,cpc)为戊二酰-7aca(glutaryl-7-aca,gl-7aca)。