菜凝集素基因的克隆及在转基因烟草中抗蚜性研究

通过pcr从苋属植物千穗谷(amaranthushypochondriacus)的总dna中扩增出苋菜凝集素(aha)的核基因片段。序列分析结果表明该基因为2453bp，含有一1538bp的内含子和两个分别为212bp和703bp的外显子。采取反向pcr的方法获得仅含该基因的编码区克隆。以此为基础与二元表达载体pbin438构建含内含子与不含内含子aha基因的植物表达载体pbahag和pbahac并通过土壤农杆菌介导转化了烟草。转化再生植株的pcr和southernblot分析表明，aha基因已整合到烟草的染色体中，有单拷贝和多拷贝的整合。用与aha蛋白高度同源的aca蛋白的抗血清进行了免疫斑点(immunodotblot)检测，结果初步表明转基因烟草有aha蛋白的表达。虫试结果表明转pbahag和pbahac烟草对蚜虫的平均抑制率分别达57.2%和48.8%，有的高达90%以上。含内含子和不含内含子的aha基因在转基因植株中的抗蚜性不同。