去n端信号肽和c端跨膜区猪卵透明带-3β蛋白在原核系统表达的研究

猪卵透明带(zonapellucida,zp)由生物化学和免疫学性质截然不同的三种糖蛋白(pzp1、pzp3α和pzp3β)组成。由于抗pzp3β抗体能在体外与人zp发生交叉反应，因此pzp3β一直被认为是研制抗受精避孕疫苗的潜在抗原之一。为了能在原核系统中获得无卵巢因子污染的pzp3β蛋白，本文采用pcr方法删除了原cdna中编码5′和3′端信号肽和跨膜区的dna顺序。扩增的pzp3β基因核心片段(pzp3β″)经dna测序验证后，通过引入其两端的ecori和sali酶切位点被定向插入pbv221质粒prpl启动子下游的多克隆区。sds-page分析表明：工程菌在热诱导后能特异地表达pzp3β蛋白，并能在蛋白印迹实验中被兔抗pzpiggs识别。