黄瓜花叶病毒cdna载体在烟草细胞中表达外源基因

为了探讨利用黄瓜花叶病毒(cmv)构建表达载体的可行性，分离了山东株(sd)cmvrna3的全长cdna。测定其全序列后，采用定点突变的方法在衣壳蛋白(cp)基因起始密码子处改造出一个nsiⅰ位点，可将外源基因引入nsiⅰ位点和cp基因终止密码子上游附近的xhoⅰ或salⅰ位点而置换掉cp基因。分别用绿色荧光蛋白(gfp)基因、β-葡糖醛酸酶(gus)基因以及小鼠二氢叶酸还原酶(dhfr)基因3种报告基因置换cp基因。将fny株cmvrna1、rna2和sdcmv嵌合rna3的cdna分别插入pcass载体的35s启动子和终止子之间，将构建的置换型载体直接以质粒的方式转染烟草原生质体，表达了3种报告基因。