bacilluspumiluswl-11木聚糖酶a的纯化、鉴定及其底物降解方式

对一株bacilluspumiluswl_11木聚糖酶的纯化、酶学性质及其底物降解模式进行了研究。经过硫酸铵盐析、cm_sephadex及sephadexg_75层析分离纯化,获得一种纯化的wl_11木聚糖酶a,其分子量为26.0kd,pi值9.5,以燕麦木聚糖为底物时的表观km值为16.6mgml,vmax值为12.63μmol(min·mg)。木聚糖酶a的ph稳定范围为60至104,最适作用ph范围则在7.2至8.0之间,是耐碱性木聚糖酶;最适作用温度为45℃～55℃,在37℃、45℃以下时该酶热稳定性均较好;50℃保温时,该酶活力的半衰期大约为2h,在超过50℃的环境下,该酶的热稳定较差,55℃和60℃时的酶活半衰期分别为35min和15min。wl_11木聚糖酶a对来源于燕麦、桦木和榉木的可溶性木聚糖的酶解结果发现,木聚糖酶a对几种不同来源的木聚糖的降解过程并不一致。采用hplc法分析上述底物的降解产物生成过程发现木聚糖酶a为内切型木聚糖酶,不同底物的降解产物中都无单糖的积累,且三糖的积累量都较高;与禾本科的燕麦木聚糖底物降解不同的是,木聚糖酶a对硬木木聚糖降解形成的五糖的继续降解能力较强。采用tlc法分析了wl-11粗木聚糖酶降解燕麦木聚糖的过程，结果表明燕麦木聚糖能够被wl-11粗木聚糖酶降解生成系列木寡糖，未检出木糖，这说明wl-11主要合成内切型木聚糖酶a，同时发酵液中不含木糖苷酶，适合用来酶法制备低聚木糖。