rgd-葡激酶突变体(k130t,k135r)的制备与活性分析

以葡激酶突变体质粒msak(k130t,k135r)-pbv220为模板,pcr重叠引物延伸法引入突变位点,并将该片段克隆至载体pbv220,构建了rgd-msak-pbv220质粒,转化大肠杆菌后热激诱导获得了高效表达,表达产物占菌体总蛋白的50%以上,且主要以可溶性形式存在,所获蛋白依次用qsepharosehp柱、sephaycryls200hr柱和sp柱进行纯化,纯化的蛋白的纯度可达98%以上,纤维蛋白溶圈法体外溶栓活性测定结果表明,所获rgd-msak蛋白溶栓活性与野生型葡激酶相当,豚鼠体内免疫试验证明突变体的免疫原性也有所降低,血小板聚集试验分析突变体蛋白的抗血小板聚集能力,rgd葡激酶突变体具有一定的抗血小板聚集能力。