巴斯德毕赤酵母表达的突变型人白细胞介素-2的发酵条件与纯化研究

在以前的研究中,通过蛋白质工程技术获得了三突变体白细胞介素_2基因(编码125位半胱氨酸→丙氨酸;18位亮氨酸→蛋氨酸;19位亮氨酸→丝氨酸),并在毕赤酵母中加以表达。进一步优化表达条件,其最适诱导条件:80%以上的通气,诱导2d,初始ph60,甲醇终浓度为10%。在上述条件下表达量占菌体总蛋白的30%以上,大约200mgl。建立了一套从毕赤酵母表达上清中分离纯化分泌型表达蛋白il_2的方法,经离心,超滤浓缩,强阳离子交换s柱和分子筛层析得到纯化的突变型和野生型il-2;其得率为27%,纯度达电泳纯并且hplc检测只有一个峰。纯化的突变蛋白对ctll-2细胞具有刺激性;与野生型il-2相比,在各种温度条件下储存的突变蛋白保留有更高的活性;突变型il-2的活力是野生型的4～5倍,具有更高的利用价值。