利用盘基网柄菌表达可溶性人fas配体

用pcr扩增从激活的人中性粒细胞中得到的编码可溶性fas配体胞外区中第141个到第281个氨基酸的cdna,将其与hcg-β信号肽片段融合到质粒mb12neo中,随后导入到盘基网柄菌ax3细胞中,得到分泌性表达hfasl的重组菌ax3-h3。为提高shfasl的表达量,对质粒pmb12neo作了改造,得到衍生质粒pmb74。利用质粒pmb74克隆表达shfasl,得到高通量表达shfasl的重组菌ax3_plu8。在复杂培养基hl_5c中,重组菌的细胞密度可达(1.5～2)×107ml,ax3-h3及ax3_plu8分泌的shfasl浓度分别为23.5μg/l及206μg/l。利用合成培养基sih培养重组菌ax3-h3及ax3-plu8,细胞密度均达到(4～5)×107m/l,shfasl浓度则分别达到111μg/l和420μg/l。