tet-on调控hsvtk表达的重组腺相关病毒载体的构建和感染活性的检测

构建含有tet基因调节系统及自杀基因hsvtk的重组腺相关病毒载体paavtrehsvtktet_on,并使用pcr技术和限制性内切酶消化进行鉴定。用构建好的重组质粒分别与辅助质粒paav_rc、phelper以磷酸钙共沉淀法转染hek293细胞,进行病毒包装后得到了aavtrehsvtktet_on重组腺相关病毒,以氯化铯密度梯度离心对包装好的病毒进行纯化。用纯化后的重组腺相关病毒感染乳腺癌细胞株mcf_7后,斑点杂交检测结果显示,hsvtk基因整合进入mcf_7细胞基因组中。有感染活性的重组腺相关病毒能将目的基因转移到宿主细胞中,在dox诱导下,gcv对aav感染的mcf_7细胞具有明显的杀伤作用。