融合蛋白gst-ulp1p在大肠杆菌中的高效可溶性表达及其活性鉴定

利用基因工程技术，体外重组小分子类泛素修饰蛋白酶1(ulp1)的活性片段，获得高表达、高特异性重组蛋白酶。从酿酒酵母saccharomycescerevisia中提取ulp1编码第403到621个氨基酸残基之间的dna片段(ulp1p)，在其c端加入6×his并连接到大肠杆菌表达载体pgex中，构建重组表达质粒pgex-ulp1p-his6。将重组质粒转化至大肠杆菌rosetta(de3)中，氨苄青霉素抗性筛选转化子。表达、纯化后，以sumo融合蛋白检测其活性。经过优化，该蛋白可溶性表达，表达量占菌体总蛋白的40.12％。可通过谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱或ni-nta凝胶亲和层析纯化得到纯度98％的蛋白。经酶切分析，比活力为1.375×104u/mg。融合蛋白gst-ulp1p-his6无需切除谷胱甘肽s-转移酶(gst)标签，具有很高的活性，制备简易；6×his标签，有利于底物蛋白切割后纯化，减少蛋白损失。本研究为制备高活力的sumo蛋白酶提供了一个新方法。