非转座子载体介导的稳定转化家蚕bmn细胞表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子

为了建立非转座子载体介导的持续表达外源基因的转化家蚕bmn细胞系，将家蚕核型多角体病毒极早期基因(ie-1)启动子控制的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(hgm-csf)基因的表达盒克隆至pizt/v5-his，获得重组载体pizt-ie-hgm-csf，该载体转染家蚕bmn细胞后，通过博莱霉素(zeocin)筛选获得了稳定转化细胞系ie-hgm-csf。转基因细胞基因组经pcr鉴定，成功检测到ie-hgm-csf，westernblotting分析结果显示转化细胞表达的重组hgm-csf的大小为22kda，elisa检测结果显示hgm-csf在转化细胞系里的表达水平大约为2814.7pg/106个细胞。