过表达nanog基因的小鼠骨髓间质干细胞对nf-κb表达的影响

核因子κb(nuclearfactorkappab，nf-κb)的激活被认为与中枢神经系统变性疾病的进展有关。新近报告nanog能抑制nf-κb的表达，为验证这一发现，通过限制性内切酶酶切和基因重组的方法，构建携带nanog基因的重组慢病毒表达载体质粒pnl-nanog-ires2-egfp，经pcr检测以及测序鉴定后，在脂质体介导下与包装质粒helper、包膜质粒vsvg共转染293t细胞包装生产慢病毒。所获慢病毒感染小鼠骨髓间充质干细胞(mmscs)后，westernblotting法检测在mmscs中nanog基因的表达，pcr、westernblotting和免疫细胞化学法检测nf-κb基因的表达。结果显示所克隆的nanog基因测序结果与genbank报道序列完全一致。构建的慢病毒载体质粒pnl-nanog-ires2-egfp经sali和bamhi双酶切后电泳鉴定正确。所获慢病毒感染mmscs后荧光激发mmscs可见绿色荧光，westernblotting检测显示nanog-mmscs组表达nanog，其他两组基本不表达。rt-pcr和westernblotting检测显示nanog-mmscs组的nf-κb表达较空载体-mmscs组及mmscs组低，有显著性差异。构建携带nanog基因慢病毒载体并在小鼠骨髓间质干细胞中成功表达，nanog基因的表达可抑制nf-κb表达，这结果为神经变性疾病的治疗提供了新思路。