单纯疱疹病毒i型糖蛋白d胞外区的真核表达及生物学活性分析

单纯疱疹病毒(herpessimplexvirus，hsv)包膜糖蛋白d(glycoproteind，gd)是hsv的结构蛋白之一，具有重要抗原表位，是目前疫苗研究的热点。为了分离纯化hsvgd1糖蛋白胞外区片段并对其生物学活性进行分析，本研究将化学合成的gd1胞外区基因片段克隆至真核表达载体pcep4，重组质粒转染hek293细胞进行瞬时表达，产物经westernblotting检测后用亲和层析法进行分离纯化，elisa检测其抗原性。以纯化的重组蛋白作为抗原免疫小鼠，elisa测血清特异性抗体效价以评价其免疫原性。构建的重组质粒经测序显示基因序列完全正确。表达产物的westernblotting分析发现，在相对分子量约46kda处有外源蛋白表达，与预期蛋白带一致。用ni柱得到了纯化的重组gd1蛋白，elisa检测显示其具有良好的抗原性，免疫小鼠7周后血清中抗体效价达到5×103。重组gd1蛋白的抗原性及免疫原性分析为hsv检测试剂和基因重组亚单位疫苗的研制提供了实验依据。