传染性法氏囊病病毒ah1株vp2基因在昆虫细胞中的表达与应用

将近期引起传染性法氏囊病(ibd)免疫预防失败的传染性法氏囊病病毒(ibdv)vp2基因，定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pfastbachta中，构建重组供体质粒pfastbachta-vp2，转化escherichiacolidh10bac感受态，筛选重组杆状病毒表达质粒pbac-vp2。用pbac-vp2转染sf9昆虫细胞，获得重组杆状病毒vbac-vp2。对重组杆状病毒vbac-vp2感染的sf9细胞，用间接免疫荧光试验(ifa)检测，具有特异性荧光；用ibdv抗体夹心elisa检测，呈阳性反应，抗原效价达到1.6×103；用westernblotting分析，在53kda处出现一条特异蛋白条带；电镜观察，重组vp2蛋白能够自组装成病毒样颗粒，在感染细胞中发现了“包涵体样”结构。用histraphp亲和层析柱纯化的重组vp2蛋白作为包被抗原，建立的ibdv抗体间接elisa检测方法具有良好的特异性。用重组杆状病毒感染的sf9昆虫细胞裂解物，免疫2周龄spf鸡，一次免疫14d后，elisa检测抗体效价为8×102，中和抗体效价为1106，攻毒实验的存活率为30％；二次免疫14d后，elisa抗体效价为3.2×103，中和抗体效价为2536，存活率为100％。在实验观察7d内，重组vp2蛋白免疫保护鸡未显任何临床症状和病理变化，法氏囊/体重比高于对照组(p＜0.05)。本实验制备的病毒样颗粒重组vp2蛋白在研制新型ibd基因工程疫苗和检测试剂方面显示出了应用前景。