基于易错pcr的黄曲霉毒素解毒酶体外分子定向进化

运用定向进化-易错pcr方法，提高黄曲霉毒素解毒酶的活力及稳定性，并结合辣根过氧化物酶(hrp)-隐性亮绿(rbg)快速高通量筛选系统，构建了库容约为104的突变体库。经过两轮易错pcr，最终分别获得了耐高温70℃突变酶a1773、ph4.0稳定性的突变酶a1476，ph4.0和ph7.5均表现稳定性的突变酶a2863，其酶活力比野生酶分别提高了6.5倍、21倍和12.6倍。经序列分析表明，发现突变酶a1773发生了glu127lys和gln613arg突变；突变酶a2863发生了gly73