一种含精-甘-天冬氨酰三肽人纤溶酶原k区缺失突变体在巴斯德毕赤酵母中的表达、纯化与特性

为获得具有抗血小板聚集作用的重组人纤溶酶原(hplg)，尝试了一种含有精-甘-天冬氨酰(rgd)三肽的hplgk区缺失突变体(rgd-hplg-?k)。首先，从pdnr-lib-hplg中克隆出hplg-?k。然后定点突变激活环内的pro559为asp559，形成rgd模序。构建的ppiczαa-rgd-hplg-?k电转化巴斯德毕赤酵母gs115，甲醇诱导表达后可产生0.16g/l培液的rgd-hplg-?k，ni-nta层析后纯度可达90％以上；westernblotting证实所获rgd-hplg-?k可与兔抗hplg抗血清反应；其24h尿激酶激活速率和纤溶活性与hplg-?k无显著差别(p=0.630，n=5)；经尿激酶激活后，rgd-hplg-?k的血小板聚集抑制率(21.8％±1.57％)显著高于hplg-?k(3.8％±0.33％)(p=0.000，n=5)。表明成功构建、表达了一种具有抗血小板聚集活性的hplg突变体，为研究新型多功能溶栓药物奠定了基础。