可调控表达甲型流感病毒m2蛋白的哺乳动物细胞系的建立与鉴定

甲型流感病毒m2蛋白是一种具有离子通道功能的跨膜蛋白，其氨基酸序列非常保守，可用于流感通用疫苗的研究。为了构建可调控的稳定表达甲型流感病毒m2蛋白的哺乳动物细胞系，首先应用pcr方法从含有流感病毒pr8株第七节段全长基因的质粒中扩增得到m2基因。将该片段亚克隆到真核表达载体pcdna5/frt/to上，用bamhⅰ和notⅰ双酶切鉴定正确后将重组质粒与表达flp重组酶的pog44质粒共转染flp-int-rex-293细胞，使目的基因整合到宿主细胞染色体。筛选具有hygromycinb抗性的细胞株。在该细胞的培养基中加入四环素以诱导目的基因表达，48h后通过间接免疫荧光方法检测到m2蛋白的表达。共得到16株高表达m2蛋白的重组细胞株，这些细胞株在传10代后仍能稳定表达目的蛋白。未加四环素诱导的细胞没有检测到m2蛋白，说明四环素调控系统严格控制着目的基因的表达。今后，该细胞系可用于流感病毒m2蛋白的功能研究、流感候选疫苗的免疫学评价以及流感病毒减毒活疫苗的研制。