山羊srebp-1基因的超表达对脂肪酸代谢相关基因表达的影响

本研究旨在通过构建西农萨能羊固醇调节元件结合蛋白-1(srebp-1)基因的重组腺病毒超表达载体，获得有感染性的病毒颗粒，并检测该基因过表达后对乳腺上皮细胞中脂肪酸代谢相关基因的影响，为进一步研究该基因在脂肪酸代谢及泌乳调控中的功能奠定基础。根据genbank中收录的西农萨能羊srebp-1基因的序列设计引物，pcr扩增后进行测序。将测序正确的目的基因连接到穿梭载体padtrack-cmv后并进行线性化，转化含有腺病毒骨架载体padeasy-1的大肠杆菌escherichiacolibj5183感受态细胞中进行同源重组，将重组成功的质粒进行pacⅰ酶线性化，转染hek293细胞进行重组腺病毒的包装、扩繁及滴度测定。病毒液感染原代乳腺上皮细胞，实时荧光定量检测srebp-1超表达效果及对脂肪酸代谢相关基因的影响。结果表明：重组腺病毒质粒构建成功，腺病毒滴度为109u/ml。病毒液感染乳腺上皮细胞48h后，srebp-1基因表达量上升大约15倍，72h后，表达量上调了30倍；对脂肪酸代谢相关基因的影响在72h较为明显，其中，脂肪酸合酶(fasn)及酰基辅酶a羧化酶(acc)均显著上调了大约两倍，过氧化物酶体增殖物激活受体(pparγ)上调了大约1.5倍，肝素x受体(lxrα)及甘油三酯水解酶(atgl)表达量升高了1.2倍；其中硬脂酰辅酶a去饱和酶(scd)表达水平无明显变化。表明在西农萨能羊乳腺上皮细胞中，srebp-1能够促进脂肪酸合成相关基因的表达，对山羊乳腺脂肪酸代谢具有调控作用。